本发明属于检测，尤其涉及一种铁线透骨草药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒hplc特征图谱的构建方法及其应用。
背景技术：
1、铁线透骨草为毛茛科植物黄花铁线莲clematis intricatebge的干燥地上部分，有祛风除湿、通络止痛功效，主治风湿性关节炎、四肢麻木、拘挛疼痛、牛皮癣、疥癞。为了确保铁线透骨草药材、饮片、标准汤剂及配方颗粒其质量的均一、稳定，建立一种新的特征图谱方法对其质量进行把控，是十分必要的。
技术实现思路
1、有鉴于此，本发明的目的在于提供一种铁线透骨草药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒hplc特征图谱的构建方法及其应用，本发明提供的构建方法可为铁线透骨草药材、饮片、标准汤剂及配方颗粒的鉴别提供更为科学的依据。
2、本发明提供了一种铁线透骨草药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒hplc特征图谱的构建方法，包括以下步骤：
3、准备供试品，所述供试品为铁线透骨草药材、铁线透骨草饮片、铁线透骨草标准汤剂或铁线透骨草配方颗粒；
4、将所述供试品溶解，得到供试品溶液；
5、将所述供试品溶液采用高效液相色谱法测定，得到对应供试品的hplc特征图谱；
6、所述高效液相色谱法的色谱条件为：色谱柱为c18柱；流动相a为乙腈，流动相b为0.5wt％磷酸溶液，梯度洗脱。
7、在本发明提供的构建方法中，所述铁线透骨草饮片为铁线透骨草药材的炮制加工品；所述铁线透骨草标准汤剂是由铁线透骨草药材经炮制后制备而成的冻干粉；所述铁线透骨草配方颗粒是铁线透骨草药材经炮制并按标准汤剂的主要质量指标加工制成的配方颗粒。
8、在本发明提供的构建方法中，所述溶解的溶剂优选为50vol％甲醇溶液，该溶剂条件下获得的色谱图各特征峰峰形好，分离度适中；所述供试品与溶剂的用量比优选为(0.2～0.5)g:25ml，该用量比例调节下获得色谱图中各色谱峰峰形与分离度较好。
9、在本发明提供的构建方法中，所述溶解优选在超声辅助下进行，以提高溶解的效率；所述超声辅助的功率优选为580～620w，更优选为600w；所述超声辅助的频率优选为35～45khz，更优选为40khz；所述超声辅助的时间优选为25～35min，更优选为30min，该超声时间下获得的色谱图峰形与分离度较好。
10、在本发明提供的构建方法中，当所述供试品为铁线透骨草药材或铁线透骨草饮片时，溶解制备供试品溶液的具体过程优选包括：将供试品过筛后与溶剂混合，超声辅助溶解，放冷，摇匀，滤过，得到的续滤液即为供试品溶液；其中，所述供试品与溶剂的用量比优选为0.5g:25ml。
11、在本发明提供的构建方法中，当所述供试品为铁线透骨草标准汤剂时，溶解制备供试品溶液的具体过程优选包括：将供试品与溶剂混合，超声辅助溶解，放冷，摇匀，滤过，得到的续滤液即为供试品溶液；其中，所述供试品与溶剂的用量比优选为0.2g:25ml。
12、在本发明提供的构建方法中，当所述供试品为铁线透骨草配方颗粒时，溶解制备供试品溶液的具体过程优选包括：将供试品研细后与溶剂混合，超声辅助溶解，放冷，摇匀，滤过，得到的续滤液即为供试品溶液；其中，所述供试品与溶剂的用量比优选为0.2g:25ml。
13、在本发明提供的构建方法中，进行所述高效液相色谱法测定时，所述梯度洗脱具体过程优选为：
14、0～9min，a相：4～8vol％，b相：96～92vol％；
15、9～16min，a相：8～13vol％，b相：92～87vol％；
16、16～20min，a相：13～15vol％，b相：87～85vol％；
17、20～25min，a相：15～13vol％，b相：85～87vol％；
18、25～30min，a相：13vol％，b相：87vol％。
19、在本发明提供的构建方法中，进行所述高效液相色谱法测定时，流动相的流速优选为0.3ml/min，在此流速条件下获得的色谱图峰形较好，分离度适中。
20、在本发明提供的构建方法中，进行所述高效液相色谱法测定时，检测波长优选为354nm，在此检测波长条件下获得的色谱图信息量较大，基线更平稳。
21、在本发明提供的构建方法中，进行所述高效液相色谱法测定时，进样量优选为1μl。
22、在本发明提供的构建方法中，进行所述高效液相色谱法测定时，色谱柱中的填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；所述色谱柱的柱长优选为80～120mm，更优选为100mm；所述色谱柱的内径优选为1.5～2.5mm，更优选为2.1mm；所述色谱柱的填充剂粒径优选为1～2μm，更优选为1.7μm。
23、在本发明提供的构建方法中，进行所述高效液相色谱法测定时，所述色谱柱的柱温优选为30℃，在此柱温条件下获得的色谱图的峰形较为对称，分离度较好，出峰较完全。
24、在本发明提供的构建方法中，进行所述高效液相色谱法测定时，理论板数按芦丁峰计算应不低于5000。
25、在本发明提供的构建方法中，优选还包括以下步骤：
26、将铁线透骨草对照药材溶解，得到对照药材参照物溶液；将芦丁溶解，得到对照品参照物溶液；
27、将所述对照药材参照物溶液和对照品参照物溶液采用高效液相色谱法测定，得到参照物的色谱图；并根据所述参照物的色谱图对供试品的hplc特征图谱的成分进行定性。
28、在本发明提供的构建方法中，溶解制备所述对照药材参照物溶液的具体过程优选包括：将铁线透骨草对照药材与溶剂混合，超声辅助溶解，放冷，摇匀，滤过，得到的续滤液即为对照药材参照物溶液；其中，所述溶剂优选为50vol％甲醇溶液；所述铁线透骨草对照药材与溶剂的用量比优选为更优选0.5g:25ml；所述超声辅助的功率优选为580～620w，更优选为600w；所述超声辅助的频率优选为35～45khz，更优选为40khz；所述超声辅助的时间优选为25～35min，更优选为30min。
29、在本发明提供的构建方法中，溶解制备所述对照品参照物溶液的具体过程优选包括：将芦丁与溶剂混合，得到对照品参照物溶液；其中，所述溶剂优选为甲醇；所述芦丁与溶剂的用量比优选为(10～40)μg:1ml，更优选为25μg:1ml。
30、在本发明提供的构建方法中，优选还包括以下步骤：
31、采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统对铁线透骨草药材的hplc特征图谱的相似度进行评价，得到由8个特征峰构成的铁线透骨草药材的hplc标准特征图谱；在所述hplc标准特征图谱中，与芦丁对照品参照物峰相对应的峰7为s峰，计算各特征峰与s峰的相对保留时间，其相对保留时间在规定值的±10％范围之内，规定值为：0.35(峰1)、0.44(峰2)、0.55(峰3)、0.61(峰4)、0.75(峰5)、0.80(峰6)、1.00(峰7)、1.16(峰8)。
32、在本发明提供的构建方法中，优选还包括以下步骤：
33、采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统对铁线透骨草饮片的hplc特征图谱的相似度进行评价，得到由8个特征峰构成的铁线透骨草饮片的hplc标准特征图谱；在所述hplc标准特征图谱中，与芦丁对照品参照物峰相对应的峰7为s峰，计算各特征峰与s峰的相对保留时间，其相对保留时间在规定值的±10％范围之内，规定值为：0.35(峰1)、0.44(峰2)、0.55(峰3)、0.61(峰4)、0.75(峰5)、0.80(峰6)、1.00(峰7)、1.16(峰8)。
34、在本发明提供的构建方法中，优选还包括以下步骤：
35、采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统对铁线透骨草标准汤剂的hplc特征图谱的相似度进行评价，得到由8个特征峰构成的铁线透骨草标准汤剂的hplc标准特征图谱；在所述hplc标准特征图谱中，与芦丁对照品参照物峰相对应的峰7为s峰，计算各特征峰与s峰的相对保留时间，其相对保留时间在规定值的±10％范围之内，规定值为：0.35(峰1)、0.44(峰2)、0.55(峰3)、0.61(峰4)、0.75(峰5)、0.80(峰6)、1.00(峰7)、1.16(峰8)。
36、在本发明提供的构建方法中，优选还包括以下步骤：
37、采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统对铁线透骨草配方颗粒的hplc特征图谱的相似度进行评价，得到由8个特征峰构成的铁线透骨草配方颗粒的hplc标准特征图谱；在所述hplc标准特征图谱中，与芦丁对照品参照物峰相对应的峰7为s峰，计算各特征峰与s峰的相对保留时间，其相对保留时间在规定值的±10％范围之内，规定值为：0.35(峰1)、0.44(峰2)、0.55(峰3)、0.61(峰4)、0.75(峰5)、0.80(峰6)、1.00(峰7)、1.16(峰8)。
38、本发明还提供了一种铁线透骨草药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒的鉴别方法，该方法采用上述技术方案所述的构建方法获得的hplc特征图谱作为鉴别铁线透骨草药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒的依据。
39、与现有技术相比，本发明提供了一种铁线透骨草药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒hplc特征图谱的构建方法及其应用，本发明提供的方法可以在较短时间内对铁线透骨草色谱峰的成分进行有效分离，且出峰多、峰与峰之间的分离度大、峰型好；该方法能够用于快速、高效的建立铁线透骨草药材、饮片、标准汤剂以及配方颗粒的hplc特征图谱，具有良好的重复性、精密度和稳定性，可以为铁线透骨草药材、饮片、标准汤剂及配方颗粒的鉴别提供更为科学的依据。
